Escherichia coli尿甘二磷酸半乳糖4-差向異構酵素的純化及活性部位之研究

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題名:	Escherichia coli尿甘二磷酸半乳糖4-差向異構酵素的純化及活性部位之研究
作者:	洪嘉聰；蔡正宗
貢獻者:	東海大學農學院
關鍵詞:	尿甘二磷酸半乳糖4-差向異構酵素；尿甘二磷酸葡萄糖；尿甘-5-[1-硫二磷酸]葡萄糖 Escherichia coli；UDP-galactose 4-epimerase；UDP[feb6]S-glucose；UDP-glucose
日期:	1995-07-00
上傳時間:	2012-06-29T01:03:29Z (UTC)
出版者:	台中市：東海大學
摘要:	尿甘二磷酸半乳糖4-差向異構酵素（UDP-galactose 4-epimerase）係純化、分離自突變種E. coli ATCC 27797。以製備型電泳取代Hydroxylapatite管柱，得純化後酵素之比活性500unit/mg；純度為290倍，純化過程活性回收率為7%。合成之尿甘-5[1-硫二磷酸] 葡萄糖（UDPαS-glucose），係自然基質尿甘二磷酸葡萄糖（UDP-glucose）的類似物。因為Pα含硫而具不對稱性，而產生Rp-和Sp-非對映異構物。二異構物能以半製備型μ Bondpak C?琠M磷酸緩衝溶液（50mM pH6.0），經高效率液態層析管柱分離。其純度高，可運用作為反應基質，以鑑定UDP-galactose 4-epimerase對基質之立體專一性。實驗結果顯示，epimerase會催化Rp-異構物，而Sp-異構物之反應速率極低，可證實其活化部位與基質 Pα結合的位置，構象很嚴緊，具有高度的立體專一性。　　　　　E. coli ATCC27797 UDP-galactose 4-epimerase purified by preparative electrophoresis method rater then hydroxylaptite column showed a specific activity of 500 units per milligram protein, the enzyme purification fold was 290 and the percentage of activity recovery 7%. Synthetic diastereoisomers Rp-and Sp-UDPαS-glucose could be separated by using HPLC semipreparative μBondpak C18 column and 50 mM phosphate buffer, pH 6.0 as elution buffer. The sterospecificity of UDP-galactose 4-epimerase to Rp-UDPαS-Glucose indicated that the epimerase showed a rigid conformation of binding site around the Pα of the substrate.
關聯:	東海學報第36卷第6期(農學院)
顯示於類別:	[校內出版品(學報)] 東海學報

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