毛細管電泳/間接化學放光偵測法的開發與應用

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Title:	毛細管電泳/間接化學放光偵測法的開發與應用
Other Titles:	Development and Application of Capillary Electrophoresis/
Authors:	廖碩彥 Liao, Shao-Yen
Contributors:	黃先生 Mr. Whang 東海大學應用化學系
Keywords:	化學放光;間接偵測 chemiluminescence;indirect detection
Date:	1995
Issue Date:	2011-05-25T08:38:05Z (UTC)
Abstract:	化學放光偵測具有高靈敏度、低背景雜訊等優點，是目前毛細管電泳中極具開發潛力的偵測方式之一。本研究目的主要在開發毛細管電泳/間接化學放光偵測技術。以luminol-過氧化氫-硫酸銅化學放光系統，利用胺基酸與銅離子具錯合特性進行間接偵測未經衍生的胺基酸。使用5mM luminol作為放光試劑、25mM過氧化氫作為氧化劑、30M硫酸銅作為催化劑，催化劑溶液中同時含30.mu.M酒石酸，並以15mM碳酸鈉作為緩衝溶液，在 pH=10的條件下可成功地偵測不經衍生的胺基酸。由於最佳間接化學放光偵測條件並非最理想的毛細管電泳分離條件，19種胺基酸中只能同時分離10種，本研究曾嘗試數種方法來改善分離情形，包括：改變電泳溶液pH 值、添加環糊精(.alpha.,.beta.,.gamma.三種型式)、陰離子型界面活性劑(SDS)及陽離子型界面活性劑(CTAB)，但是都僅能部份改善解析度。在儀器介面設計上因為使用傳統的T型連接方式，造成間隙體積過大，分析帶太寬。嘗試利用較小內徑的反應毛細管來降低間隙體積，結果使得電泳毛細管中的電場強度下降，胺基酸的解析度更差。比較紫外-可見光直接偵測與化學放光間接偵測對電泳效率的影響，顯示T型連接器導致電泳效率下降15倍。本方法對胺基酸的分析檢量線線性範圍約為兩個數量級 (0.03mM-10mM)，絕對偵測極限約為100fmol。由於在本系統下無法將19種胺基酸完全分離，再加上未經前處理的真實樣品中常有干擾物存在，對於市售飲料的分析不盡理想，本法的實用性有待改進。
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